Piper amalago L. é uma espécie perene pertencente à família Piperaceae com comprovada atividade leshmanicida, anti-inflamatória, ansiogênica, antimicrobiana, diurética e natriurética. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial de enraizamento de estacas caulinares das porções apicais, medianas e basais de Piper amalago L. em diferentes substratos. As diferentes estacas foram confeccionadas a partir de plantas coletadas em uma população natural, e plantadas em tubetes contendo os três substratos avaliados: solo agrícola peneirado, substrato comercial Plantmax^® e vermiculita. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado em arranjo fatorial 3 x 3 (3 porções do ramo e 3 substratos), com 4 repetições de 12 estacas por unidade amostral. A avaliação ocorreu 45 dias após o plantio. As porcentagens de enraizamento variaram de 2,08 a 22,92%. Não houve interação significativa entre os fatores. Avaliando os fatores isoladamente, constatou-se que o tipo de estaca apresentou significância apenas para a porcentagem de estacas com brotações. Estacas basais foram superiores às apicais para esta variável. O fator substrato foi significativo para todas as variáveis analisadas, exceto para a porcentagem de estacas com retenção das folhas. Maiores porcentagens de enraizamento foram verificadas utilizando o solo agrícola como substrato, atingindo 17,4% em média. O solo foi também superior aos demais substratos no número, comprimento e massa fresca de raízes.